上海祎鴻凱氏定氮儀整理12點(diǎn)凱氏定氮法注意事項分享給大家:
(1)測試樣品應(yīng)是均勻的,原來是固體樣品的須研磨細(xì)碎均勻,液體樣品應(yīng)攪拌均勻或振搖均勻。
(2)樣品放入定氮容器內(nèi),不要沾附頸上,萬一沾附可用少量水沖下,以免被檢樣消化不完全,結(jié)果偏低。
(3)消化時如不容易呈透明溶液,可將定氮瓶放冷后,慢慢加入30%過氧化氫2-3ml,促使氧化。
(4)在整個消化過程中,不要用強(qiáng)火,保持和緩的沸騰,使火力集中在凱氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下。使氮有損失。
(5)如硫酸缺少,過多的硫酸鉀會引起氨的損失,這樣會形成硫酸氫鉀,而不與氨作用,因此當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時,要增加硫酸的量。
(6)加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn),硫酸銅為催化劑,硫酸銅在蒸餾時作堿性反應(yīng)的指示劑。
(7)混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠,可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液。
(8)氨是否完全蒸餾出來,可用PH試紙試餾出液是否為堿性。
(9)吸收葉也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸,過剩的酸液用0.01N堿液滴定,計算時,A為試劑空白消耗堿液數(shù),B為樣品消耗堿液數(shù),N為堿液濃度,其余均相同。
(10)以硼酸為氨的吸收液,可省去標(biāo)定堿液的操作,且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格,亦可免去用移液管,操作比較簡便。
(11) 向蒸餾瓶中加入濃堿時,往往出現(xiàn)褐色沉淀物,這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng),生成氫氧化銅,經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時銅離子與氨作用,生成深l藍(lán)色的結(jié)合物[Cu(NH3)4]2+
(12) 這種測算方法本質(zhì)是測出氮的含量,再作蛋白質(zhì)含量的估算。只有在被測物的組成是蛋白質(zhì)時才能用此方法來估算蛋白質(zhì)含量。